на электронную версию
журнала и новости
Н.В. МОРОЗ, кандидат ветеринарных наук, зав. лабораторией профилактики болезней птиц, ФГБУ «ВНИИЗЖ»
С.В. ФРОЛОВ, кандидат ветеринарных наук, ведущий научный сотрудник лаборатории профилактики болезней птиц, ФГБУ «ВНИИЗЖ»
В.Ю. КУЛАКОВ, кандидат ветеринарных наук, ведущий научный сотрудник лаборатории профилактики болезней птиц, ФГБУ «ВНИИЗЖ»
Инфекционный бронхит кур – значимая экономическая проблема. Инфекционный бронхит кур (Bronchitis infectiosa avium - лат., ИБК) – вирусная высококонтагиозная болезнь, характеризующаяся поражением органов дыхания у молодняка и репродуктивных органов у кур-несушек с длительным снижением яйценоскости, а также нефрозонефритным симптомокомплексом (рис. 1). В естественных условиях к вирусу ИБК восприимчивы куры всех возрастных групп.
Возбудитель ИБК - РНК-содержащий вирус семейства Coronaviridae. Вирионы имеют липопротеидную оболочку, полиморфны, размером от 80 до 150 нм (рис. 2).
Экономические потери при ИБК в основном обусловлены снижением привесов у бройлеров и яичной продуктивности, вынужденной выбраковкой птицы. От ИБК погибает до 5% цыплят в возрасте 1–5-месяцев [Бессарабов Б. Ф., 2009]. Если птица заболевает в начале яйценоскости, то ее продуктивность существенно снижается, яйценоскость может упасть до 20–30% от паспорта породы на весь период содержания. Установлено, что убыток от ИБК на 1000 кур-несушек в возрасте 25–26 недель составляет $ 3567,4, в возрасте 42 недель - $4210,8 [Colvero L., 2015].
Наблюдения, проведенные в течение последних 30 лет, показывают, что возбудитель ИБК эволюционирует. Отмечено увеличение числа серовариантов вируса [Kaleta E., 1991]. При этом существенные изменения антигенных свойств, выявляемых в серологических реакциях, могут быть обусловлены незначительными перестройками аминокислотного состава структуры вириона [Cavanagh D., 1995]. Происходящие в генофонде вирусных популяций мутации, вставки, делеции и рекомбинация гена структурного белка S1 наследуются и определяют антигенное разнообразие возбудителя в природе [Liu S., 2009]. Кроме этого происходят изменения тропизма возбудителя. Трансформация генома «респираторного» вируса приводит к возникновению варианта, поражающего почки [Feng K., 2017].
Расширение антигенного плюралитета вируса ИБК существенно усложнило профилактику заболевания, поскольку поствакцинальный иммунитет, созданный известными коммерческими препаратами, не всегда оказывал надлежащий протективный эффект. В этой связи стало целесообразным использовать определение «протектотип» [Lohr J., 1988] как характеристику перекрестной иммунной защиты штаммов ИБК [Malo А., 1998].
В начале 90-х были описаны штаммы вируса ИБК, относящиеся к новому генотипу 793B [Gough R.E., 1992; Parsons D., 1992], при этом было показано, что иммунитет, созданный штаммом генотипа Massachusetts, не препятствовал инфекции вируса генотипа 793B [Сook J., 1996].
Решение данной проблемы могло быть достигнуто разработкой гомологичной вакцины, а также путем расширения протективного спектра вакцин или, другими словами, подбором вакцинных штаммов и схем вакцинации, расширя-ющих иммунную протекцию. Например, было установлено, что масштаб поствакцинальной защиты мог быть увеличен в результате последовательной иммунизации птиц штаммом Ma5, относящегося к известному генотипу Massachusetts и штаммом 4-91 генотипа 793B [Kuehne P., 2003].
Вакцина против инфекционного бронхита кур из штамма «ВНИИЗЖ793/В»
В 2018 г. в ФГБУ «ВНИИЗЖ» была завершена работа по аттенуации штамма вируса ИБК относящегося к генотипу 793В. Вирус был выделен в 2016 г. из патологического материала, полученного от цыплят-бройлеров птицефабрики Нижегородской области. Штамм получил название «ВНИИЗЖ 793/В». На основе данного штамма была разработана живая вакцина. Препарат был тестирован на биологическую чистоту (исключение контаминантов). Все производственные генерации штамма «ВНИИЗЖ 793/В» (Original Virus, Master Seed и Working Seed) прошли контроль в ПЦР на отсутствие геномов наиболее вероятных вирусов и микоплазм. Каждая серия готовой вакцины тестируется на исключение контаминации бактериальной микрофлоры и грибами по ГОСТ 28085.
Вакцина представляет собой лиофилизат для приготовления суспензии для перорального, интраназального (окулярного) применения и спрей-метода. Препарат изготовлен из экстраэмбриональной жидкости СПФ-эмбрионов кур, инфицированных аттенуированным вирусом ИБК.
Экспериментально была определена оптимальная иммунизирующая доза вакцины, которая составила 1000 ЭИД50. Изучали развитие гуморальной иммунной реакции птиц на введение вакцины (рис. 3). Установили, что продолжи-тельность напряженной фазы (логарифмическая величина титра антител свыше 2,7) поствакцинального иммунитета составляет не менее 50 дней.
При проведении доклинических исследований вакцины был использован один из наиболее информативных методов исследования – тест цилиарной активности трахеальных имплантантов [Cubillos A., 1991; Cavanagh D., 1997]. Данный тест позволял непосредственно наблюдать реакцию клеток реснитчатого эпителия трахеи на воздействие полевого (вирулентного) вируса у вакцинированных и не вакцинированных цыплят (Рис. 4). Пороговым показателем теста, который характеризует защищенность птицы, считали два балла. Установили, что цилиарная активность клеток у вакцинированных птиц после искусственного заражения была значительно выше, чем в контроле. Продолжительность протективного периода клеточного иммунитета составляла практически 50 дней.
Исследовали реактогенное действие вакцины. С этой целью в начальный период развития вакцинного вируса в организме птицы (через 4–6 суток после прививки) регистрировали процент цыплят с присутствием кратковременных поствакцинальных реакций (Рис. 5). Было установлено, что истечения из носа, одышка, хрипы и подобные респираторные симптомы, продолжительностью до 2 суток, присутствовали не более чем у 16 % цыплят, привитых в первые сутки жизни. Птица, привитая в возрасте 15 суток, демонстрировала менее 1,4% поствакцинальных реакций.
Сравнивали различные методы вакцинации. Использовали интраназальнй способ, выпойку и спрей. Определяли напряженность гуморального поствакцинального иммунитета. В результате, при сопоставлении средних титров сывороточных антител, достоверных различий установлено не было.
По результатам проведенных доклинических исследований «Вакцины против инфекционного бронхита кур из штамма «ВНИИЗЖ793/В» живой сухой», произведенной в ФГБУ «ВНИИЗЖ» в соответствии с «Правилами надлежащей производственной практики» было сделано заключение, что основные характеристики препарата соответствуют требованиям, изложенным в «Manual of Diagnostic Tests and Vaccines for Terrestrial Animals 2018 (Capter 3.3.2. – Avian infectionis bronchitis)».
В настоящее время проходят клинические испытания «Вакцины против инфекционного бронхита кур из штамма «ВНИИЗЖ793/В» живой сухой» на базе ФБГБУ «ВНИИЗЖ» и ряда птицефабрик. Подача документов на регистрацию разработанной вакцины планируется в ноябре 2019 г. Приведены логарифмические значения тиров циркулирующих антител (lgT), установленные соответственно заданным интервалам времени (L, сутки) после вакцинации. Пунктиром выделена средняя тенденция.
Оценки цилиостатического эффекта, установленные в эксплантантах трахеи вакцинированных (◊) и контрольных (Δ) цыплят (‘Y- средние баллы трех эксплантантов от одной трахеи), установленные в остром опыте (искусственное за-ражение) соответственно заданным интервалам времени (L, сутки) после вакцинации. Пунктиром показана средняя тенденция по интервалам («Y=Σ’Y/n).
Смотрите также
